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GC-MS衍生化法检测先天性畸形羊水中的非极性氨基酸

Quantification of the nonpolar amino acids in amniotic fluid of congenital malformation by gas chromatography mass spectrometry (GC-MS) derivatization method

摘要目的 利用气相色谱质谱(GC-MS)衍生化法对孕先天性畸形儿孕妇羊水中的非极性氨基酸,包括丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、脯氨酸(Pro)和苯丙氨酸(Phe)进行定量检测;探讨疾病组与正常组孕妇羊水中非极性氨基酸的差异及其意义.方法 取100 μL羊水上清液,加入甲醇去蛋白后提取上层清液吹干,进行MSTFA衍生化,利用GC-MS检测并分析检测结果.结果 该方法具有良好的灵敏度、精密度、准确度以及回收率.在最优化的检测条件下,被检测氨基酸最低检出限为0.12~0.38 mg/L,线性范围为0.5~ 10 mg/L,添加回收率为91.12%~104.41%,日内及日间相对标准偏差(RSD)为0.84%~9.33%.用建立的方法对17例疾病组和13名正常组孕妇的羊水样本进行测定,统计分析结果表明,疾病组孕妇羊水中亮氨酸和异亮氨酸含量显著降低(P<0.01),其余3种氨基酸水平无明显差异.结论 本方法经方法学验证,可作为羊水中氨基酸含量的测定方法,具有良好的应用前景;亮氨酸的减少可能参与了先天性畸形的发生.

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