换一批
换一批HIPK3基因3′UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与靶向miR-146的验证
Construction of dual luciferase reporter plasmid of HIPK3 3′UTR and verification its targeting miR-146
摘要目的 构建 HIPK3基因3′非编码区(3′UTR)双荧光素酶报告质粒,分析 miR-146对HIPK3的调控作用.方法 通过miRDB 数据库和DIANA TOOLS数据库预测miR-146与HIPK3基因的结合位点.将HIPK3基因的3′UTR序列以及其突变体插入至荧光素酶报告质粒psiCHECK-2,构建野生型(HIPK3-WT)及突变型HIPK3-MU)重组双荧光素酶报告质粒.将培养的293T 细胞分为6组,1)HIPK3-WT+NC 阴性对照;2)HIPK3-WT+miR-146a mimics;3)HIPK3-WT+miR-146b mimics;4)HIPK3-MU+NC阴性对照;5)HIPK3-MU+miR-146a mimics;6)HIPK3-MU+miR-146b mimics,48 h后检测6组细胞中荧光素酶活性.结果 成功构建了HIPK3-WT及HIPK3-MU重组双荧光素酶报告质粒;HIPK3-WT和miR-146b mimics共转染293T细胞后,荧光素酶活性降低(P<0.05).结论 miR-146a 与HIPK3基因不存在靶向关系,miR-146b可以调控HIPK3基因3′UTR.
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