换一批
换一批大动脉炎患者外周血单个核细胞RT-qP CR内参基因的选择
Validation of reference genes for the normalization of the RT-qP CR in peripheral blood mononuclear cells of patients with Takayasu arteritis
摘要目的 筛选适于在大动脉炎(TAK)患者和健康人群(HC)之间比较外周血单个核细胞(PBMC)中mRNA表达水平的内参基因.方法 提取PBMC中的总RNA,应用RT-qPCR,分别采用geNorm、NormFinder、BestKeeper 3种软件程序,分析β-glucuronidase、GAPDH、ACTB、SDHA、HPRT1、RPL13A、B2M、YWHAZ和PKG19个基因的mRNA表达稳定性.以T-bet、GATA3和RORC作为目的基因,比较不同稳定性的内参基因对mRNA相对丰度的影响.结果geNorm筛选得到的基因组合为B2M-SDHA,NormFinder和BestKeeper筛选出最稳定的内参基因均为HPRT1;3种方法均显示GAPDH的稳定性较差.结论 自身免疫病患者在接受免疫抑制药物治疗时,原本稳定表达的基因可能会上调或下调;在样本量较小时,稳定性更好的内参基因可能更有助于检测组间差异.
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