换一批
换一批兔抗鼠MORF4L1 a多克隆抗体的制备与鉴定
Polyclonal antibody preparation and identification of rabbit anti?mouse MORF4L1 isoform a
摘要目的 制备兔抗鼠MORF4L1 a变体的多克隆抗体以区分MORF4L1的a、b变体.方法 根据对小鼠MORF4L1 a、b变体差异序列的抗原性、同源性的分析结果,合成MORF4L1 a的N端第52～66位的序列作为抗原肽(15肽,KSAVRPRRSEKSLKT),偶联KLH载体作为抗原免疫家兔,用Dot blot鉴定抗血清的特异性.对特异性良好的1号家兔抗血清进行抗原亲和层析纯化,用间接ELISA测定抗体效价.此外,构建MORF4L1 a、b变体的原核表达质粒和真核表达质粒.利用原核表达系统表达纯化后和在细胞中表达的MORF4L1 a、b蛋白进行Western blot鉴定抗体的特异性.结果 1号免疫兔抗血清能特异性识别多肽;纯化后抗体的效价达到1:512000;成功构建pGEX?4T?2?M4S、pGEX?4T?2?M4L原核表达质粒和pCMV?3Tag?6?M4S、pCMV?3Tag?6?M4L真核表达质粒,并在原核系统和真核系统中成功表达.该抗体能与MORF4L1 a特异结合.结论 成功制备了效价高、特异性较强的兔抗鼠MORF4L1 a抗体,为进一步揭示MORF4L1可变剪接的生物学意义和不同变体的生物学功能奠定了实验基础.
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