换一批
换一批摘要目的 通过构建铜缺乏的细胞模型探究是否存在铜依赖的酶参与铜缺乏导致的心肌肥厚的发生.方法 使用CRISPR/Cas9技术,构建Ctr1基因敲除的大鼠心肌细胞株H9c2(Ctr1-/-);收集野生型(WT)、Ctr1-/-、铜螯合剂TTM处理的H9c2细胞中的蛋白质,通过铜亲和树脂蛋白质结合实验联合质谱分析筛选铜依赖的酶;通过Western blot检测缺铜细胞中该酶的下游信号通路.结果 成功构建Ctr1基因敲除的H9c2细胞株,该细胞株中铜含量显著降低(P<0.05);质谱分析筛选出能与铜相互作用的去泛素化酶OTUB1;铜缺乏的H9c2细胞中泛素化水平升高;铜缺乏条件下H9c2细胞中OTUB1靶蛋白DEPTOR水平下降;mTOR信号通路激活.结论 去泛素化酶OTUB1参与铜缺乏的细胞应答,提示其可能参与铜缺乏引起的心肌肥厚的发生.
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