新型冠状病毒非结构蛋白14的表达及酶活性分析

Expression and enzymatic activity analysis of non-structure protein 14 of SARS-CoV-2

二维码有效期 120s

摘要目的获得纯度较高和有酶活性的新型冠状(新冠)病毒(SARS-CoV-2)非结构蛋白14(Nsp14).方法根据大肠埃希氏菌(E.coli)的密码子偏好性,分析新冠病毒原始株基因nsp14的稀有密码子,并对其进行优化.将nsp14克隆至4个不同的表达载体并进行表达;通过对表达量和可溶性的比较分析,选择一个表达效果最好的重组表达质粒并优化表达条件;目的蛋白经谷胱甘肽亲和柱纯化后,用半胱氨酸家族蛋白酶(3C)切除融合标签,再分别利用谷胱甘肽亲和柱和分子筛柱纯化蛋白质.最后通过尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳对其活性进行鉴定.结果 Nsp14的基因在大肠杆菌中表达存在较多的稀有密码子,其中部分稀有密码子呈现近距离分布和串联分布.pGEX6P1-GST-OPTI-Nsp14重组质粒在大肠杆菌中表达的可溶性效果最好,其最佳表达温度为30℃.经纯化后获得了较纯的不含标签的Nsp14,该蛋白具有核酸酶活性.结论本研究成功地表达和纯化出具有核酸酶活性的新冠病毒Nsp14,为进一步推进对新冠病毒Nsp14的结构和功能研究奠定了基础,为筛选靶向Nsp14的抗病毒治疗药物提供了有利的条件.