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Sitravatinib联合Niraparib对黏膜黑色素瘤细胞系增殖、凋亡和自噬的影响及其机制

Effect and mechanism of Sitravatinib combined with Niraparib on proliferation,apoptosis and autophagy in mucosal melanoma cell lines

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摘要目的研究抗血管生成药物Sitravatinib联合多聚(腺苷二磷酸[ADP]-核糖)聚合酶抑制剂(PARPi)Niraparib对黏膜黑色素瘤细胞的作用及其可能的机制.方法 CCK8法检测Sitravatinib和Niraparib在黏膜黑色素瘤(MM)细胞系的半数抑制浓度(IC50);CompuSyn模型计算不同浓度联合条件下的联合指数(CI).细胞集落形成实验测定细胞增殖;流式细胞测量术测定细胞凋亡;Western blot检测蛋白质表达;RT-qPCR检测mRNA表达.结果在人阴道黏膜来源黑色素瘤细胞系(HMVⅡ)和人外阴黏膜黑色素瘤腹股沟淋巴结转移病灶来源细胞系(GAK)中 Sitravatinib(2 μmol/L)联合Niraparib(20 μmol/L)条件下CI值分别为0.19和0.15;与对照组及单药组相比,联合组细胞增殖能力显著下降(P＜0.05或P＜0.01 或P＜0.001);细胞凋亡率显著升高(P＜0.01 或P＜0.001),凋亡标志物蛋白质和mRNA表达均显著升高(P＜0.001);细胞自噬标志物蛋白质和mRNA表达显著升高(P＜0.01 或P＜0.001);DNA损伤相关蛋白质表达显著升高.而与对照组相比,Sitravatinib单药组和联合组重组酶辐射敏感蛋白51(RAD51)表达显著下降.随着Sitravatinib剂量逐渐升高至 2 μmol/L,RAD51 蛋白和mRNA表达显著下降(P＜0.05 或P＜0.01),BRCA1与BRCA2的mRNA表达显著下降(P＜0.05 或P＜0.01 或P＜0.001).结论 Sitravatinib联合Niraparib可抑制黏膜黑色素瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡并促进细胞自噬,其机制可能与Sitravatinib抑制同源重组修复(HRR)水平相关.