换一批SFFV启动子高效驱动mCherry-GFP-LC3B双荧光体系在红系细胞中进行自噬检测
A highly efficient SFFV promoter-driven mCherry-GFP-LC3B dual-fluorescence system for autophagy monitoring in erythroid cells
摘要目的 建立由造血细胞中高活性的脾焦点形成病毒(SFFV)启动子驱动的mCherry-GFP-LC3B慢病毒表达体系,并实现红系终末分化细胞自噬流的高效动态示踪.方法 构建 pRSC-SFFV-mCherry-GFP-LC3B慢病毒质粒,包装慢病毒并感染人红系祖细胞系(HUDEP-2)及小鼠胎肝来源原代红系细胞;结合血清剥夺及氯喹干预模型,利用荧光成像、Western blot及流式细胞测量术分析红系终末分化细胞的自噬动态变化.结果 SFFV启动子在HUDEP-2(97%vs.60%)及原代小鼠胎肝红系细胞(83%vs.1%)中表达的阳性率均显著高于巨噬细胞病毒(CMV)启动子(P＜0.01,P＜0.001),且不影响正常分化.血清剥夺后,自噬溶酶体(红斑)数量增加,伴随LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高及p62 蛋白下降;氯喹干预则导致自噬体(黄斑)累积(P＜0.001),且抑制效应呈剂量依赖性(r2=0.92).结论 SFFV驱动双荧光体系可高效实时示踪红系细胞自噬流动态,为红系分化及相关贫血性疾病的机制研究提供了高灵敏度工具.
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关键词
SFFV启动子自噬mCherry-GFP-LC3B双荧光红系细胞SFFV promoterautophagydual-fluorescent mCherry-GFP-LC3Berythroid cells
栏目名称
DOI
10.16352/j.issn.1001-6325.2025.07.0866
发布时间
2025-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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