换一批原代及转化的人血管内皮细胞模型的建立
The establishment of primary and transformed human vascular endothelial cell models
摘要目的 建立原代及猿猴病毒 40(SV40)T抗原转化的人血管内皮细胞模型,为内皮研究提供可利用资源.方法 分别分离培养人脐静脉内皮细胞、人脐动脉内皮细胞、大隐静脉内皮细胞、子宫内膜及肝癌旁组织中内皮细胞,利用含有SV40 大T、小t抗原的慢病毒进行转化,体外连续传代培养,通过RNA测序分析转化前后内皮细胞转录组差异.对转化后的内皮细胞,流式细胞术检测CD31 的表达,PCR法进行种属鉴定及支原体检测,短重复序列谱(STR)检测鉴定细胞身份.转化后脐血管内皮进行人类白细胞抗原(HLA)检测,并且通过慢病毒感染及集落筛选的方式建立Cas9 稳定表达的脐静脉内皮细胞.结果 建立了 187 株转化人脐静脉内皮细胞、1 株转化脐动脉内皮细胞、5 株转化大隐静脉内皮细胞、1 株子宫内膜来源转化内皮细胞及 1 株肝组织来源转化内皮细胞、9 株稳定表达Cas9 蛋白的单集落脐静脉内皮细胞株.188 株脐带来源转化血管内皮细胞中CD31 阳性率≥90%为 168 株,另20 株阳性率在 20%～90%.5 株转化大隐静脉细胞CD31 阳性细胞比例分别为 93%、76%、93%、50%和 96%.RNA测序证明转化后内皮细胞增殖能力(包括周期调控、DNA复制合成等)通路改变且在体外培养过程具有稳定性.转化后内皮细胞种属鉴定为人源性,STR结果与原代一致且具有唯一性,无支原体的污染,国家生物医学实验细胞资源库已收藏并可提供共享服务.结论 建立了一系列原代及SV40 T抗原转化的人血管内皮细胞模型,为心血管疾病、炎性反应、肿瘤及免疫相关疾病研究提供基础.
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关键词
血管内皮细胞人脐静脉内皮细胞SV40大T抗原CD31Cas9vascular endothelial cellshuman umbilical vein endothelial cellsSV40LT antigenCD31Cas9
分类号
Q811.4（生物工程学仿生学）
栏目名称
DOI
10.16352/j.issn.1001-6325.2025.12.1600
发布时间
2025-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
中国医学科学院医学与健康科技创新工程重大协同创新项目（2021-I2M-1-053）
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