换一批创伤伤口分泌物中产气荚膜梭菌快速定量检测方法的建立及应用
Establishment and clinical application of a new quantitative method for rapid detection of Clostridium perfringens in wound secretion
摘要目的 建立检测创伤伤口分泌物中产气荚膜梭菌的实时荧光定量PCR方法,为气性坏疽的早期快速诊断提供新手段.方法以产气荚膜梭菌16S rDNA基因序列为模板,在其保守区域设计特异性引物及探针,以PCR扩增产物重组质粒作为定量检测的标准品,绘制标准曲线.对荧光定量PCR体系和反应条件进行优化,并验证方法的特异性、敏感性、重复性及临床应用的可行性.结果所建立方法检测产气荚膜梭菌具有高度特异性,与创伤弧菌等23种相关细菌均无交叉反应.检测灵敏度以纯菌计达9×102cfu/ml,相当于9cfu/反应.反应体系具有很高的稳定性.整个操作过程仅需3h.5例创伤可疑分泌物样本的荧光定量PCR检测结果与细菌培养完全一致.结论 本研究建立的实时荧光定量PCR方法特异、灵敏、快速,可用于创伤伤口分泌物中产气荚膜梭菌的日常检测以及战时和突发事件时的批量应急诊断.
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