摘要目的 探讨TAR DNA结合蛋白43(TDP-43)对氧糖剥夺(OGD)诱导小鼠HL-1心房肌细胞凋亡的影响及其机制.方法 将体外培养的小鼠HL-1心房肌细胞分为:(1)对照组及不同OGD处理时间(2、4、8、16 h)组,采用CCK-8法检测细胞活力,Western blotting检测TDP-43蛋白表达水平,以此确定OGD诱导时间点用于后续研究;(2)对照组与OGD组,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,JC-1染色法检测线粒体膜电位,化学发光法检测三磷酸腺苷(ATP)相对含量,微板法检测丙二醛(MDA)含量,WST-1法检测超氧化物歧化酶(SOD)含量.将转染慢病毒的小鼠HL-1心房肌细胞分为:(1)阴性对照慢病毒干预组(NC-shRNA)、TDP-43 敲低慢病毒干预组(TDP-43-shRNA1、TDP-43-shRNA2、TDP-43-shRNA3),Western blotting检测TDP-43蛋白表达水平,选择慢病毒敲低效率最高的TDP-43-shRNA用于后续试验;(2)NC-shRNA组、TDP-43-shRNA组、OGD+NC-shRNA组、OGD+TDP-43-shRNA组,在常氧条件和OGD条件下,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,MitoTracker染色法检测线粒体形态,JC-1染色法检测线粒体膜电位,化学发光法检测ATP含量,流式细胞术检测活性氧(ROS)荧光强度,微板法检测MDA含量,WST-1法检测SOD含量.结果 CCK-8法检测结果显示,随OGD时间的延长,小鼠HL-1心房肌细胞的活力逐渐下降;Western blotting检测结果显示,TDP-43蛋白表达水平逐渐升高,两者均呈现较强的时间依赖性.与对照组比较,在OGD 16 h时小鼠HL-1心房肌细胞活力最低(P<0.05)、TDP-43蛋白表达量最高(P<0.05),据此后续实验选择OGD 16 h为诱导时间点.与对照组比较,OGD组细胞凋亡率、线粒体膜电位荧光强度比值、MDA含量升高,ATP相对含量、SOD含量降低,差异均有统计学意义(P<0.05).Western blotting检测结果显示,与NC-shRNA组比较,TDP-43-shRNA2组TDP-43蛋白表达水平降低最为明显(P<0.05),敲低效率最高,因此选择TDP-43-shRNA2进行后续实验.流式细胞术检测结果显示,在常氧条件下,与NC-shRNA组比较,TDP-43-shRNA组细胞凋亡率无明显变化(P>0.05);在OGD条件下,与OGD+NC-shRNA组比较,OGD+TDP-43-shRNA组细胞凋亡率降低(P<0.05).MitoTracker染色结果显示,与NC-shRNA组比较,TDP-43-shRNA组线粒体形态完整,无明显变化;OGD+NC-shRNA组线粒体数量增多,多数为碎片状,分布散乱;与OGD+NC-shRNA组比较,OGD+TDP-43-shRNA组线粒体形态有所恢复.在常氧条件下,与NC-shRNA组比较,TDP-43-shRNA组线粒体膜电位荧光强度比值、ATP相对含量、ROS荧光强度、MDA含量、SOD含量均无明显变化(P>0.05);但在 OGD条件下,与OGD+NC-shRNA组比较,OGD+TDP-43-shRNA组细胞线粒体膜电位荧光强度比值、ROS荧光强度、MDA含量降低,ATP相对含量、SOD含量升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 TDP-43通过调控心肌细胞凋亡加重OGD诱导的线粒体功能障碍,因此,敲低TDP-43的表达有望成为缺血性心肌病的潜在治疗策略.