换一批
换一批从大肠杆菌中表达、纯化宁乡猪N-乙酰谷氨酸合成酶并制备其多克隆抗体
Expression and Purification of N-acetylglutamate Synthase from Ningxiang Pig in Escherichia Coll and Preparation of Its Polyclonal Antibody
摘要N-乙酰谷氨酸合成酶催化生成的N-乙酰谷氨酸(NAGS)对于哺乳动物尿素循环第一个酶--氨基甲酰磷酸合成酶Ⅰ变象异构激活是必需的.N-乙酰谷氨酸合成酶定位于肝脏和小肠线粒体基质中,通过提供N-乙酰谷氨酸调节氨基甲酰磷酸合成酶Ⅰ的活性来调节尿素合成.我们用RT-PCR方法从宁乡猪肝脏中扩增了N-乙酰谷氨酸合成酶的开发阅读框,并将此基因连接到原核表达载体上,构建了pET-NAGS质粒.将重组质粒转化到Ecoli BL21(DE3),在IPTG诱导下表达His-NAGS融合蛋白.通过SDS-PAGE,得出NAGS分子量约为40kDa.一步亲和层析纯化后,我们将纯化后的NAGS蛋白注射到新西兰大白兔中制备多克隆抗体.通过免疫组化和免疫印迹测试抗体,结果表明此抗体有较好的抗原性和特异性.据我们所知,这是第一次在大肠杆菌中表达来源于宁乡猪的NAGS.
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分类号
R332
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1007-7146.2008.06.009
发布时间
2009-03-10
基金项目
国家自然科学基金（30528006）；
中国科学院引进国外杰出人才基金（2005-14;2005-1-7）；
国家重点基础研究发展计划(973计划)（2004CB117502）；
中国科学院知识创新工程项目（Kscx2-Yw-N-051;Kscx2-Yw-N-022）
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