换一批一种缺失去泛素化功能的RHD1突变体保留特异性结合线性泛素链活性
A RHD1 Variant Lacking Deubiquitination Function Retains Specific Binding Activity to Linear Ubiquitin Chain
摘要线性泛素链连接方式特殊且被发现时间较短,目前商用的线性泛素链特异性抗体种类少且特异性仍有待提高.RHD1是一种木瓜蛋白酶样去泛素化酶,仅特异性识别线性泛素链.其主要酶活位点残基的第13位半胱氨酸(C13)突变,使得RHD1突变体失去去泛素化功能,但是与线性泛素链的结合活性水平仍不高.本研究在此突变体的基础上继续优化互作界面点突变,期望实现提升特异性结合活性.为此,本研究利用RHD1和线性双泛素蛋白复合物结构模型分析蛋白质间互作界面上氨基酸的理化性质,设计了RHD1突变体文库.本研究通过重叠延伸PCR法定点突变RHD1多肽链氨基酸,使用大肠杆菌BL21(DE3)菌株表达突变体重组蛋白,采用酶联免疫吸附法(ELISA)成功筛选到与线性四泛素蛋白结合活性显著提升的RHD1突变体,该突变体包含C13A与A92T点突变.该RHD1突变体有望被开发成为一种有助于研究线性泛素链的蛋白质配体工具,并且有巨大的潜力应用于临床诊断和开发相关治疗药物.
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关键词
RHD1去泛素化酶线性泛素链定点突变原核表达酶联免疫吸附法RHD1 deubiquitinating enzymesTetra-Ub(M1-linked)site-specific mutationprokaryotic expressionELISA
分类号
Q81（生物工程学《生物技术》）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1007-7146.2024.05.006
发布时间
2024-11-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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