换一批斑马鱼miR-194b基因敲除品系的构建及其对肝脏发育的影响
Construction and Effect of the miR-194b Gene Knockout Line on Liver Development in Zebrafish
摘要microRNAs(miRNAs)是一类广泛参与各种生理过程的小非编码RNA,它们通过与靶标mRNA结合来调控蛋白质编码基因的表达.miR-194基因在肝脏组织中高表达,是人类早期肝损伤诊断的关键血清生物标志物.然而,该基因在肝损伤进展中的作用尚不清楚.生物信息学分析结果表明,miR-194b基因在多个物种中高度保守.为了揭示该基因在肝脏发育中的作用,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建miR-194b基因敲除的斑马鱼品系,并对其在肝脏发育中的作用进行初步探讨.首先利用在线网站设计两个miR-194b的特异性靶点,通过PCR扩增获得sgRNA模板DNA,DNA转录得到sgRNA.将sgRNA和Cas9蛋白共注射到斑马鱼1细胞胚胎中.将注射胚胎养至2月龄后筛选得到F0代嵌合突变体.F0代个体与野生型斑马鱼杂交得到F1代杂合突变体,经基因型鉴定及Sanger测序筛选出相同突变类型的F1代个体,F1代杂合子自交最终得到F2代纯合突变体.miR-194b纯合突变体未表现出明显的发育异常且具备正常的繁殖能力.miR-194b过表达试验结果表明,斑马鱼胚胎呈剂量依赖性发育畸形,其畸形的主要表现为肌节紊乱、心包水肿、肝脏变小、鱼鳔缺失,这证明miR-194b在斑马鱼胚胎早期发育和器官生成中发挥了重要作用.本研究成功构建了miR-194b敲除斑马鱼,为未来探究miR-194在肝脏发育中的作用提供了有效模型.
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分类号
Q812（基因工程《遗传工程》）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1007-7146.2025.04.005
发布时间
2025-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（82170308）
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