换一批血液肿瘤CD44基因检测及4亚型克隆原核表达
Detection of the expression of CD44 gene in leukemia and prokaryotic expression of CD44 isoform 4 subtype in
摘要目的：检测血液肿瘤细胞株K562、HL-60及临床急慢性粒细胞白血病患者外周血细胞CD44分子表达、分型情况，通过基因重组技术原核表达CD44分子。方法根据CD44 mRNA剪切模式设计引物，PCR扩增CD44基因，测序比对分析分子亚型，然后酶切插入原核表达载体pET32a(+)，转化大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导表达后进行Western blot分析。结果9例临床标本均为CD44isoform4型，K562细胞株中未能检测到CD44，HL-60细胞株CD44为isoform4变异型；在37℃1 mM的IPTG诱导2h后，CD44基因胞外区片段(hCD44om)的蛋白表达量最大，约占菌体总蛋白的48.6%，Western blot检测显示为特异性的CD44蛋白。结论 AML和CML外周血标本分子为CD44isoform4型，HL-60细胞株为CD44isoform4变异型，可能为mRNA新的剪切体及基因组不稳定突变所致；在大肠埃希菌中成功表达CD44isoform4型蛋白胞外区多肽，为后续单克隆抗体研制奠定了基础。
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关键词
白血病干细胞人CD44基因原核表达基因重组技术Leukemic stem cells (LSCs)Human CD44 geneProkaryotic expressionGene recombination technique
DOI
10.3969/j.issn.1674-1129.2015.01.003
发布时间
2015-03-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
广东省医学科研基金（A2012220）
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