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基于CRISPR/Cas9技术构建人CLCN7基因编辑载体

Construction of human CLCN7 gene editing vector based on CRISPR/Cas9 technology

二维码有效期 120s

摘要目的为修复石骨症致病基因(CLCN7)进行前期探索,采用CRISPR/Cas9技术构建CLCN7基因编辑表达载体.方法根据sgRNA设计原则,在CLCN7外显子区设计一对sgRNA,合成四条单链DNA寡核苷酸,退火后连接于CRISPR/Cas9质粒的BspQ I酶切位点处,然后转染感受态大肠杆菌DH5α,并通过氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆,扩大培养.结果最后经过PCR和Sanger测序鉴定获得了两个基因编辑表达载体CLCN7-sg1RNA-CRISPR-Cas9和CLCN7-sg2RNA-CRISPR-Cas9.结论基因编辑载体的成功构建为CLCN7突变修复提供了工作基础.

作者 孙国平 ^[1] 马驰宇 ^[2] 朱鹏 ^[1] 薛雯 ^[3] 龚蔚蔚 ^[3] 欧明林 ^[4] 学术成果认领

作者单位 深圳市坪山区人民医院中心实验室,广东深圳,518118 ^[1] 广西师范大学生命科学学院,广西桂林 541004;中国人民解放军第九二四医院中心实验室,广西代谢性疾病研究重点实验室,广西桂林 541002 ^[2] 中国人民解放军第九二四医院中心实验室,广西代谢性疾病研究重点实验室,广西桂林 541002 ^[3] 中国人民解放军第九二四医院中心实验室,广西代谢性疾病研究重点实验室,广西桂林 541002;深圳市人民医院临床医学研究中心,广东深圳 518020 ^[4]

关键词石骨症 CRISPR/Cas9技术 CLCN-7基因基因编辑载体

分类号 R393（基础医学）R681（骨科学《运动系疾病、矫形外科学》）

栏目名称

实验研究

DOI 10.3969/j.issn.1674-1129.2020.03.015

发布时间 2020-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

基金项目

坪山区卫生系统科研项目（201801）深圳市卫生计生系统科研项目（201601065）深圳市科技计划（JCYJ20180305163846927）广西自然科学基金（2015GXNSF-BA139176）