基于PI3K/Akt信号通路探讨"赤芍-附片"对肝细胞炎症损伤的影响
Effects of the couplet medicines of"peony root and prepared common monkshood branched root"on the inflammatory damage of hepatocytes based on the PI3K/Akt signaling pathway
摘要目的 基于磷脂酰激醇3激酶(phosphati-dylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB又称Akt)信号通路,探讨"赤芍-附片"对肝细胞炎症损伤的保护作用.方法 体外培育L02细胞株,设立正常组、模型组、空白血浆组、"赤芍-附片"组、Copanlisib(PI3K抑制剂)组,采用D-半乳糖联合脂多糖干预构建肝细胞炎症损伤模型.通过CCK-8法筛选含药血浆最佳干预浓度及时间;透射电镜观察细胞超微结构;ELISA法检测白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达水平;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-q PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)测定PI3K/Akt通路mRNA及蛋白表达水平.结果 较之正常组,模型组受损细胞器及自噬体数量增加,IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著升高(P<0.01),PI3K、Akt mRNA及磷酸化蛋白表达水平明显降低(P<0.01).较之模型组,"赤芍-附片"组细胞形态相对正常且自噬体数量减少,IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著下降(P<0.01),PI3K、Akt mRNA及磷酸化蛋白表达上调(P<0.01或P<0.05).结论 "赤芍-附片"药对可能通过调控PI3K/Akt信号通路,减少IL-1β、IL-6、TNF-α分泌,从而减轻D-半乳糖联合脂多糖诱导的肝细胞损伤.
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