大鼠海马神经元neurobasal无血清的原代培养方法
Establishing a serum-free primary culture method for hippocampal neurons of rats
摘要目的:建立纯度和活力较高前无血清原代培养薄马神经元的方法.方法:新生SD犬鼠海马,用neuro-basal培养基培养,免疫荧光鉴定神经元纯度,MTT法检测其活力.结果:神经元接种12~24 h后贴壁,并长出细小突起,3 d具有典型神经元形态特征,4 d突起形成稀疏的神经纤维网络,8 d后神经元5-10个聚集成团,突起密集,生长稳定,12 d后出现细胞碎片.Tubulin荧光染色显示清晰的神经元,突起绵长且相互交织,占细胞总数的66.7%;GFAP荧光染色的细胞数量少,突起短粗,占33.7%.培养1-5 d MTT代谢率逐渐上升,6~11 d处于平台期,11 d后下降.结论:neurobasal无血清培养获得的神经元纯度大于60%,6-11 d的细胞适于细胞学实验.
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