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甲型H3N2流感病毒候选标准株的筛选及其评价

Screening and evaluation of candidate reference strains for influenza A(H3N2)virus

摘要目的:依据《病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准》(WS/T 812-2022),筛选甲型H3N2流感病毒的候选标准毒株,并进行实验室评价,旨在为我国流感病毒检测、疫苗研发和疾病防控提供本土化、标准化的毒株资源.方法:从广东省2020年分离的甲型H3N2流感病毒毒株中筛选出2株候选株,通过蚀斑纯化技术获得单克隆毒株,结合细胞病变效应(CPE)情况、电镜形态学观察、基因型鉴定、病毒血凝实验、支原体检测及全基因组测序,对毒株生物学、活性和稳定性进行评价.结果:筛选出的2株甲型H3N2流感病毒毒株均无支原体污染,且同一样本产生的空斑均为同一基因型,感染MDCK细胞后可引发典型CPE.电镜观察显示病毒颗粒符合典型的甲型H3N2流感病毒颗粒特征.病毒连续传代5次后,红细胞凝集实验结果均稳定在1∶32~1∶64,均获得血凝素蛋白(HA)、神经氨酸酶(NA)、基质蛋白(MP)、非结构蛋白(NS)、核蛋白(NP)、聚合酶酸性蛋白(PA)、聚合酶碱性蛋白1(PB1)和聚合酶碱性蛋白2(PB2)8个节段全基因组序列,这2株毒株的核苷酸序列与氨基酸序列均未发生突变.结论:本研究建立并验证了甲型H3N2流感病毒的候选标准株,为病原检测、诊断试剂开发及疫苗药物研发提供了关键物质基础,同时为其他病原微生物国家候选标准株的建立提供了技术参考.

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