换一批
换一批真核表达载体pcDNA3.1(+)-vlL-10的构建及其在SD大鼠骨髓基质干细胞的表达
Construction and expression of eukaryotic expression vector pcDNA3.1 (+) /vIL-10 in mesenchymal stem cells of rat
摘要目的 构建携带免疫调节因子vIL-10cDNA的真核表达载体,转染至SD大鼠骨髓基质干细胞,观察免疫调节因子vIL-10在骨髓基质干细胞的表达.方法 PCR扩增原核载体PET-28α/vIL-10,获得目的 基因vIL-10,目的 基因在大肠杆菌中扩增后连入真核表达载体PcDNA3.1(+),转染大鼠骨髓基质干细胞.用G418筛选得到vIL-10高表达的细胞,对照组为pcDNA3.1(+)直接转染的骨髓基质干细胞.结果 经PCR、酶切、测序鉴定显示按设计构建的载体pcDNA3.1(+)-vIL-10,已成功转染骨髓基质干细胞.RT-PCR检测到510bp目的 片段vIL-10在骨髓基质干细胞表达,SDS-PAGE电泳表明在骨髓基质干细胞有vIL-10蛋白的表达.结论 vIL-10mRNA和蛋白在骨髓基质干细胞中表达.
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