换一批MCF-7细胞瞬时基因表达转染模式的建立
THE CONSTRUCTION OF TRANSIENT GENE EXPRESSION TRANSFECTION SYSTEM IN MCF-7 CELLS
摘要目的建立一种高效、简便、低毒、价廉的瞬时基因表达细胞转染模式. 方法选择人乳腺癌细胞系MCF-7,采用Polyethylenimine(PEI)作为转染剂,对细胞密度、载体DNA量、PEI氮与DNA磷的比率(PEI-N:DNA-P)以及PEI-DNA混合物与细胞共存的无血清培养时间等对转染效率的影响进行了比较分析.结果转染时的24孔板每孔接种的细胞以2×105为宜,PEI-N:DNA-P的最优比率不是固定的,它与转染时DNA的量有关,每孔转染1μgDNA时其最优PEI-N:DNA-P比率为33:1左右,而每孔转染4μg DNA时其最优PEI-N:DNA-P比率为9:1左右.另外,PEI-DNA混合物与细胞共存的无血清培养时间至少需要3 h,最佳时间为5～7 h.结论利用转染剂PEI,控制合适的细胞密度、DNA质量、PEI-N:DNA-P比率和无血清培养的时间,可成为一种高效、简便、低毒、价廉的瞬时基因表达的细胞转染模式.
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