换一批人同源异形盒基因HOXB9多克隆抗体的制备和活性鉴定
Preparation and characterization of homeobox B9 (HOXB9) polyclonal antibody
摘要目的 制备兔抗人同源异形盒基因HOXB9的多克隆抗体,为后续深入研究HOXB9蛋白的功能提供工具.方法 采用聚合酶链反应(PCR)和DNA重组技术,构建HOXB9基因5’端7458碱基片段到原核表达载体pGEX-4T-1和pMal-C2x中,热休克法转化及异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导表达谷胱甘肽转移酶标签的HOXB9 N端融合蛋白和麦芽糖结合蛋白标签的HOXB9 N端融合蛋白.纯化GST-HOXB9 N端融合蛋白免疫新西兰白兔,ELISA鉴定效价后,颈动脉放血,收集血清,纯化抗体.免疫印迹法及免疫沉淀法鉴定抗体有效性及特异性.结果 本实验制备的抗体能够特异识别目标分子的单一条带,并且具有较强的免疫沉淀天然构象的HOXB9蛋白的能力;采用所制备的抗体检测发现,HOXB9蛋白在小鼠免疫器官、胰脏、结肠、肺、小脑、雌性生殖系统及睾丸中表达较高,其他器官表达较低或无表达.结论 成功制备了特异而有效的兔抗人HOXB9蛋白多克隆抗体,此多克隆抗体可用于免疫印迹法分析及免疫沉淀实验.
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关键词
HOXB9纯化蛋白多克隆抗体免疫印迹法新西兰白兔Homeobox B9Fusion proteinPolyclonal antibodyWestern blottingNew Zealand rabbit
分类号
R392.11（医学免疫学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.0529-1356.2013.04.005
发布时间
2013-11-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
高等学校博士学科点专项科研基金（20100001110046）
北京市与中央在京高校共建项目（30830048）
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