换一批二维电泳和质谱技术鉴定肝细胞癌相关N-连接糖蛋白
Identification of hepatocellular carcinoma associated N-linked glycoproteins by two dimensional electrophoresis and mass spectrometry
摘要目的 鉴定与肝细胞癌(HCC)发生发展相关的差异表达N-连接糖蛋白.方法 采用刀豆凝集素A(ConA)、晶状体凝集素(LCH)、雪花凝集素(GNA)等3种植物凝集素组成的亲和层析柱,分别从肝永生化细胞系L02和HCC细胞系Huh7、PLC5、SNU449中纯化N-连接糖蛋白、二维电泳分析差异表达的蛋白质斑点,质谱、生物信息学等技术鉴定差异表达蛋白,Western blotting验证了转录调控肿瘤蛋白(TCTP)、上皮细胞黏附分子(EpCAM)和膜联蛋白A2(annexin A2)在肝永生化及HCC细胞和HCC及癌旁组织中的表达规律,体外侵袭实验检测TCTP沉默后对SNU449的侵袭力影响.结果 质谱、生物信息学等技术共鉴定出42个差异表达的蛋白质分子/异质体(HCC细胞中高、低表达的蛋白/异质体分别为14个、28个),代表32个蛋白质分子,其中的22个蛋白含有至少1个N糖基化位点(NetNGlyc l.0预测).这些差异表达的蛋白主要参与氧化还原内稳态维系、碳水化合物/能量代谢、糖酵解、抗凋亡等生物学过程.Western blotting检测表明,TCTP、EpCAM和annexin A2在6个肝癌细胞系PLC5、HepG2、SNU449、Huh7、HCC7721和SNU473及肝癌组织中表达显著升高,siRNA介导的TCTP沉默明显抑制了HCC细胞系SNU449的体外侵袭能力.结论 TCTP、EpCAM和annexin可能参与了HCC发生发展过程,TCTP可能成为HCC靶向治疗的分子靶点之一.
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关键词
肝细胞癌N-连接糖蛋白植物凝集素质谱二维电泳Hepatocellular carcinomaN-lined glycoproteinsLectinMass spectrometryTwo-dimensional electrophoresis
分类号
R735.7（消化系肿瘤）
栏目名称
DOI
10.16098/j.issn.0529-1356.2015.04.009
发布时间
2015-09-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（81072039）
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