慢病毒载体介导的类固醇生成因子-1沉默调控子宫内膜基质细胞蜕膜化与自噬
Lentiviral vector mediated steroidogenic factor-1 silencing regulating decidualization and autophagy of endometrial stromal cells
摘要目的 探讨慢病毒载体介导的类固醇生成因子-1(SF-1)沉默对人子宫内膜基质细胞(hESCs)蜕膜化进程的影响及机制.方法 收集子宫内膜异位症(EM)患者与正常妊娠者的子宫内膜组织,通过Real-time PCR和免疫组织化学染色检测SF-1的差异表达情况.从正常妊娠者的子宫内膜组织中分离并鉴定hESCs,将hESCs分为对照组、雌二醇(E2)+孕酮(P4)组、短发夹RNA(shRNA,sh)-正常对照(NC)+E2+P4 组、sh-SF-1+E2+P4 组,进行对应处理后,倒置显微镜下观察hESCs形态变化,Real-time PCR和Western blotting分别检测细胞内人胰岛素样生长因子结合蛋白 1(IGFBP-1)、泌乳素(PRL)的mRNA表达水平和蛋白表达水平,流式细胞术测定细胞周期分布,免疫荧光染色观察细胞内自噬标记物微管相关蛋白轻链 3(LC3)表达情况,Western blotting测定细胞内自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、Beclin-1表达水平.结果 EM患者子宫内膜组织中SF-1 mRNA相对表达量和SF-1蛋白阳性率均高于正常妊娠者子宫内膜组织(P<0.05).与sh-NC+E2+P4 组比较,sh-SF-1+E2+P4 组细胞多为长梭形,未见明显蜕膜化,IGFBP1、PRL的 mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均显著下调(P<0.05),G0/G1 期细胞比例显著减少而S期细胞比例显著增加(P<0.05),细胞内LC3 荧光表达增强,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高,Beclin-1 蛋白相对表达量也显著上调(P<0.05).结论 EM 患者子宫内膜组织内SF-1 表达升高,通过慢病毒载体介导的SF-1 沉默能够抑制hESCs蜕膜化过程,该作用可能与调控细胞自噬水平相关.
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