基于灌注系统对CUBIC组织透明化技术的优化

Optimisation of CUBIC tissue clearing technology based on perfusion methods

二维码有效期 120s

摘要目的为了缩短清晰无障碍脑成像鸡尾酒和计算分析(CUBIC)技术的透明时间,提高透明效率,探索亲水性组织透明技术应用的可能性,本研究对CUBIC技术进行灌注优化后,与 4 种亲水性透明化方法在组织透明效果、透明时间、面积变化、体积变化及腺相关病毒(AAV)荧光保留情况等方面进行了比较.方法取 6 只成年美国癌症研究所(ICR)小鼠的脑、肝、脾和肾分别采用SeeDB、FRUIT、ScaleS、CUBIC的方法进行透明化处理,使用Image J 1.8.0 测算样本的面积和灰度值,排水法测量透明前后体积,比较各组的透明效果、时间以及大小变形.通过改进灌注速率与最佳灌注剂量对CUBIC技术进行灌注优化,每组实验样本量为6.另在16 只成年小鼠的大脑运动皮层定位注射AAV,4 周后取其颈髓节段透明化处理,荧光照片经过ImageJ1.8.0 测量平均荧光强度,评估不同技术的荧光保存情况.结果灌注CUBIC的最佳灌注速率和灌注剂量分别是15 ml/min和200 ml.对于透明能力和速度,灌注CUBIC技术的平均灰度值最低且用时最短,而CUBIC消耗的时间最长,SeeDB、FRUIT、ScaleS并没有显示出良好的透明能力.在面积和体积变化方面,几种技术对组织或器官透明后均有不同程度的膨胀.在荧光保留方面,灌注CUBIC对绿色荧光蛋白(GFP)荧光信号的保留效果最好,其次是 CUBIC、ScaleS、FRUIT和 SeeDB.结论灌注CUBIC技术与其他技术相比,组织透明效果最好,透明时间最短,AAV荧光保留最多.