雄激素对急性海马脑片神经元树突棘和突触蛋白的快速非基因组作用
Rapid non-genomic effects of androgen on dendritic spine density and synaptic proteins in neurons of acute hippocampal slices
摘要目的:制备急性海马脑片,探讨睾酮(T)、双氢睾酮(DHT)、睾酮-牛血清白蛋白(T-BSA)对海马脑片神经元树突棘密度和突触蛋白[突触素(SYN)、突触后致密物质95(PSD95)]的非基因组效应.方法:选用3月龄SD雄性大鼠,麻醉后取脑,在人工脑脊液中剥离海马组织,制备300 μm的冠状海马脑片.随机在0、15、30、60、120 min 5个时间点使用细胞核染料DAPI和PI染色,评估神经元活性.将急性海马脑片随机分为对照组、睾酮组、DHT组和T-BSA组.睾酮和DHT的药物作用浓度为10 nmol/L,T-BSA为0.36 nmol/L.给药1h后,通过Golgi-Cox染色、免疫荧光组织化学染色和免疫印迹观察各组神经元树突棘密度以及SYN和PSD95的变化.结果:DAPI和PI同时染色显示,急性海马脑片神经元在0、15、30、60、120 min 5个时间点上活细胞百分比差异无统计学意义.Golgi-Cox染色实验显示,与对照组相比,睾酮组、DHT组和T-BSA组的树突棘密度明显增加;睾酮组、DHT组和T-BSA组之间树突棘密度差异无统计学意义.免疫荧光组织化学染色和免疫印迹实验显示,与对照组相比,睾酮组、DHT组和T-BSA组的SYN和PSD95蛋白表达明显增加;睾酮组、DHT组和T-BSA组之间SYN和PSD95蛋白表达差异无统计学意义.结论:制备的急性海马脑片神经元在2 h内细胞活性良好.雄激素通过非基因组效应增加了急性海马脑片神经元树突棘密度以及SYN和PSD95的表达.
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