登革2型病毒E蛋白基因的酵母表达

YEAST EXPRESSION OF E PROTEIN IN DENGUE-2 VIRUS

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摘要为研究登革病毒与蚊虫相互作用的分子机制,本研究对DENV-2的E蛋白基因进行了毕赤酵母分泌表达.首先,经RT-PCR方法克隆DENV-2的E蛋白基因,将克隆的基因与表达载体pPICZaB连接以构建表达重组子;并经酶切、PCR、测序筛选实验鉴定正确重组子.然后,重组子经氯化锂法转化毕赤酵母菌KM71H获得转化子;经抗生素、表型鉴定、PCR筛选得到Muts型的多拷贝转化子.最后,经甲醇诱导基因表达,Western-blotting方法鉴定蛋白表达情况及最佳表达时间.本研究对DENV-2的E蛋白成功进行了分泌表达,并且确定其表达最佳发酵时间为96 h;为进一步研究登革病毒与蚊虫相互作用的分子机制奠定了基础.

作者刘美德 ^[1] 冀霞 ^[2] 余张 ^[3] 杨正国 ^[3] 罗森 ^[3] 赵瑞君 ^[2] 赵彤言 ^[4] 学术成果认领

作者单位军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所,北京100071;北京市疾病预防控制中心,北京市预防医学研究中心,北京100013 ^[1] 山西医科大学病原生物学教研室,太原,030001 ^[2] 贵阳医科大学基础学院,贵阳,550004 ^[3] 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所,北京,100071 ^[4]

关键词登革2型病毒 E蛋白分泌表达毕赤酵母 Dengue virus type 2 E protein Secretion expression Pichia pastoris

主题词蛋白(Egg White)病毒(Viruses)基因(Genes)毕赤酵母(Pichia)研究(Research)

栏目名称著述

DOI 10.3969/j.issn.1005-0507.2017.04.003

发布时间 2018-06-01

基金项目

国家自然科学基金委青年科学基金项目