基于CRISPR/Cas13a系统的发热伴血小板减少综合征病毒快速检测方法的建立

A RAPID CRISPR/CAS13A SYSTEM-BASED METHOD FOR DETECTING SEVERE FEVER WITH THROMBOCYTOPENIA SYNDROME VIRUS

二维码有效期 120s

摘要目的建立基于CRISPR(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats,CRISPR)系统的快速、灵敏的现场发热伴血小板减少综合征病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)核酸检测方法.方法首先,经序列比对分析得到SFTSV S基因特异性保守区,设计并筛选多酶恒温扩增(multienzyme isothermal rapid amplification,MIRA)引物和靶标CRISPR RNA(CRISPR RNA,crRNA),经荧光信号和免疫层析试纸读取检测结果.为提升检测敏感度在单反应体系中加入多个检测靶标crRNA.并利用蜱感染模拟样本和蜱源样本验证该方法对蜱样本现场核酸检测的有效性.结果 MIRA-CRISPR/Cas13a荧光法检测SFTSV的最低检测限为 1 copy/μL,试纸法的最低检测限为 10 copies/μL.特异性实验表明SFTSV与其他 4 种阴性对照病原均无交叉反应.该方法检测蜱感染模拟样本的灵敏度优于RT-PCR法.应用所建立的方法检测 29 份蜱源SFTSV样本,共检出 20 份阳性样本和 9 份阴性样本,与RT-PCR检测结果符合率为 100%.结论本文所建立的方法可用于SFTSV的现场快速检测.

作者丁康慧 ^[1] 黄俊 ^[1] 范娇 ^[2] 邱少富 ^[3] 刘洪波 ^[3] 刘鸿博 ^[3] 宋宏彬 ^[4] 学术成果认领

作者单位安徽医科大学公共卫生学院,合肥 230032 ^[1] 中国医科大学公共卫生学院流行病学教研室,沈阳 110000 ^[2] 中国人民解放军疾病预防控制中心,北京 100070 ^[3] 安徽医科大学公共卫生学院,合肥 230032;中国人民解放军疾病预防控制中心,北京 100070 ^[4]

关键词发热伴血小板减少综合征病毒 CRISPR/Cas13a 等温扩增蜱核酸检测 CRISPR/Cas13a SFTSV Isothermal amplification Tick-borne pathogen Nucleic acid detection

分类号 R373.3

栏目名称著述

DOI 10.3969/j.issn.1005-0507.2024.03.004

发布时间 2024-10-25