重组长链脂肪酸醇氧化酶的分离纯化及特性研究
Purification and Characterization of Recombinant Long-chain Fatty Acid Alcohol Oxidase
摘要目的:从fao基因转化的E.coli BL21/DE3菌分离纯化重组酿酒酵母长链脂肪酸醇氧化酶,并对其理化性质进行研究.方法:应用硫酸铵分级沉淀、phenyl-sepharose HR 5/5层析等方法分离纯化长链脂肪酸醇氧化酶,应用SDS-PAGE电泳测定其相对分子量,并对其Km、酸碱稳定性及其底物特异性进行分析.结果:应用上述分离方法得到电泳呈单一条带的酶蛋白,相对分子量大约为64 000,得率为17.6%以上;该酶对十二烷醇的Km在2.5和3.0 μmol/L之间,最适pH值为8.5,在pH 7.0环境中,酶活性为pH 8.5时的60%;对十二烷醇催化的相对活性较其它一些长链的二醇和脂肪酸醇为高.结论:从fao基因转化的E.coli BL21/DE3菌分离出重组酿酒酵母长链脂肪酸醇氧化酶,该酶为碱性酶,其最适底物为十二烷醇,但也可氧化一些长链的二醇和脂肪酸醇.
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