痘苗生长因子和胸苷激酶双基因缺失表达双荧光溶瘤痘病毒的构建及其对胰腺癌细胞的杀伤作用

Construction of VGF and TK gene deletion expressing double fluorescent oncolytic poxviruses and its killing effect on pancreatic cancer cells

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摘要目的:构建痘苗生长因子(vaccinia growth factor,VGF)和胸苷激酶(thymidine kinase,TK)双基因缺失同时表达绿色荧光蛋白(GFP)和DsRed双荧光的溶瘤痘病毒,并研究其对胰腺癌细胞的杀伤作用.方法:在病毒TK基因处利用同源重组方法将病毒晚期启动子F17R调控的GFP基因和早晚期启动子SEL调控的DsRed基因克隆入缺失VGF基因的VSC20亲本病毒,构建同时缺失VGF和TK双基因的重组溶瘤痘病毒vvDD-GFP-DsRed.同时利用CCK-8法和结晶紫染色法检测该病毒对胰腺癌细胞Patu8988和BxPC-3的杀伤作用.结果:通过同源重组和软琼脂筛选获得vvDD-GFP-DsRed重组溶瘤痘病毒.CCK-8法结果显示,与MOI=0相比,MOI分别为1,10时,vvDD-GFP-DsRed对Patu8988细胞和BxPC-3细胞具有明显的杀伤作用,且在此范围内随MOI值增加杀伤效果逐渐增强(P均＜0.05).与MOI=0相比,Patu8988细胞在MOI为0.01时存活率低(P＜0.05),且在结晶紫染色法测定中形成了明显的空斑.结论:成功构建vvDD-GFP-DsRed重组溶瘤痘病毒,其对胰腺癌细胞具有明显的杀伤作用.

作者徐岷 ^[1] 夏瑜 ^[1] 周冲 ^[2] 刘黎琼 ^[3] 周改 ^[1] 施海峰 ^[2] 于峰 ^[4] 张尤历 ^[1] 学术成果认领

作者单位江苏大学附属医院消化内科,江苏镇江,212001 ^[1] 江苏大学生命科学研究院,江苏镇江,212013 ^[2] 深圳市南山医院血液科,广东深圳,518052 ^[3] 江苏大学生命科学研究院,江苏镇江212013;上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室,上海200032 ^[4]

关键词溶瘤痘病毒胰腺癌免疫治疗 oncolytic vaccinia virus pancreatic cancer immuno-therapy

主题词病毒(Viruses)肿瘤(Neoplasms)胰腺肿瘤(Pancreatic Neoplasms)细胞(Cells)胸苷激酶(Thymidine Kinase)

分类号 R393

栏目名称 基础医学

DOI 10.13312/j.issn.1671-7783.y150284

发布时间 2016-06-30

基金项目

江苏省自然科学基金资助项目 上海市肿瘤研究所重点实验室开放课题