换一批卡波氏肉瘤病毒编码的miR-K7-3p重组慢病毒载体构建及其对血管内皮细胞增殖的影响
Construction of overexpression plasmid carrying KSHV-encoded miR-K7-3p and identification of its role in cell proliferation
摘要目的:构建卡波氏肉瘤病毒(KSHV)编码的miR-K7-3p的重组慢病毒载体,并检测其对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖能力的影响.方法:将miR-K7-3p的序列及互补序列插入miR-30茎环结构,以此为模板扩增出目的片段,插入慢病毒载体mpCDH-CMV-MCS-EF1-tRFP(简写为mpCDH,tRFP基因可表达红色荧光蛋白)中,构建重组慢病毒载体mpCDH-miR-K7-3p.将构建的目的质粒mpCDH-K7-3p与包装质粒psPAX2、包膜质粒pMD2.G共同转染人胚肾上皮细胞(293 T),包装表达miR-K7-3p的慢病毒.采用病毒梯度稀释法测定病毒滴度.用包装成功的miR-K7-3p慢病毒感染HUVECs,荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-K7-3p的表达,CCK-8及平板克隆实验检测细胞增殖力.结果:双酶切鉴定、核酸序列测定与比对结果证实重组慢病毒质粒mpCDH-miR-K7-3p构建成功.qRT-PCR检测到重组慢病毒感染的HUVECs中miR-K7-3p的表达水平升高.增殖实验结果显示,miR-K7-3p慢病毒感染后的HUVECs增殖能力明显强于对照组.结论:miR-K7-3p可以明显促进HU-VECs的增殖.
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关键词
卡波氏肉瘤病毒miR-K7-3p慢病毒人脐静脉内皮细胞细胞增殖平板克隆Kaposi′ssarcoma-associatedherpesvirusmiR-K7-3plentivirushumanumbilicalvein endothelial cellsproliferationplate cloning
医学主题词
病毒(Viruses)细胞增殖(Cell Proliferation)人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells)内皮, 血管(Endothelium, Vascular)质粒(Plasmids)
分类号
R73-36（肿瘤学实验研究）
栏目名称
DOI
10.13312/j.issn.1671-7783.y160282
发布时间
2017-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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