换一批
换一批HMGB2启动子报告基因载体的构建、活性验证及与其结合的转录因子的预测
Construction and identification of the activity of HMGB2 promoter reporter vector and forecast of its binding transcription factors
摘要目的:构建高迁移率族蛋白B2(high mobility group box2,HMGB2)启动子荧光素酶报告基因载体,并对其进行活性验证,预测可能与HMGB2启动子结合的转录因子.方法:在NCBI Genbank数据库中查询HMGB2基因启动子区域序列,运用PCR扩增HMGB2启动子序列片段,将其克隆至pGL3-Basic载体中,构建重组质粒pGL3-HMGB2-promoter,并通过双酶切和测定核酸序列鉴定.采用虫荧光素酶报告实验验证pGL3-HMGB2-promoter重组质粒的活性,进一步通过在线软件PROMO预测可以与HMGB2启动子序列结合的转录因子.结果:经限制性内切酶酶切鉴定和核酸序列比对,证实pGL3-HMGB2-promoter重组质粒构建成功.虫荧光素酶报告实验结果显示,构建的重组质粒具有启动子活性.PROMO在线软件分析结果表明,有72个转录因子可能与HMGB2启动子序列结合.结论:成功构建了含有HMGB2启动子序列的荧光素酶报告基因重组质粒,该质粒具有启动子活性,且有72个转录因子可能与HMGB2启动子序列结合,促进HMGB2的转录.
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关键词
高迁移率族蛋白B2启动子虫荧光素酶报告实验转录因子high mobility group box2promoterluciferase reporter assaytranscription factors
分类号
R393
栏目名称
基础医学
DOI
10.13312/j.issn.1671-7783.y180049
发布时间
2018-06-25
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