换一批
换一批核受体辅活化蛋白7与自噬体蛋白LC3的相互作用
Nuclear receptor co-activator 7 interacts with the autophagosomal protein LC3
摘要目的:探索核受体辅活化蛋白7(nuclear receptor co-activator 7,NCOA7)与微管相关蛋白轻链3(microtu-bule-associated protein light chain 3,LC3)的相互作用,并确定其结合位点.方法:在胃癌AGS细胞中行质谱分析,在HEK293细胞中行GST-LC3沉淀实验,分别检测两种细胞中LC3结合蛋白;采用分子克隆法构建NCOA7不同截短体和点突变体;免疫印迹法检测NCOA7的截短体ΔN462,ΔN650,ΔN650-I749/750A质粒蛋白的表达水平;GST-LC3与NCOA7突变体的沉淀实验鉴定NCOA7与LC3的结合位点.结果:质谱分析和GST-LC3沉淀实验结果表明,NCOA7是LC3结合蛋白.免疫印迹结果显示,NCOA7不同截短体和点突变体质粒蛋白均有表达.GST-LC3与NCOA7突变体的沉淀结果显示,NCOA7 N端WEDL基序和C端WEII基序是LC3结合位点.WEII基序与LC3结合受到NCOA7的651～720位氨基酸结构抑制,是一个可调节的LC3结合位点.结论:NCOA7是LC3结合蛋白,其N端WEDL和C端WEII与LC3结合.
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