换一批
换一批提升上清液Wnt3a蛋白含量的L-Wnt3a细胞培养体系及其促进多能干细胞诱导黑素细胞分化的效应研究
L-Wnt3 a cell culture system with increased contents of Wnt3 a in supernatant and its efficacy of inducing differentiation of pluripotent stem cells into melanocytes
摘要目的:明确L-Wnt3a条件培养基的收集方案并标定Wnt3a蛋白浓度,验证其作为多能干细胞向黑素细胞分化体系中Wnt3 a来源的作用.方法:通过观察L-Wnt3 a细胞的生长特性及其分泌Wnt3 a蛋白量特点,设定收集条件培养基的参数,使用ELISA法对收集到的条件培养基进行Wnt3a蛋白浓度的标定,配制出明确Wnt3a浓度的黑素细胞分化培养基,对胚胎干细胞株WA09及诱导多能干细胞株WTC-11细胞进行黑素细胞的悬浮诱导分化,对获得的诱导黑素细胞进行黑素相关基因表达检测及Masson-Fontana染色等相关验证.结果:优化后的L-Wnt3 a条件培养基收集体系能够稳定高效获取Wnt3 a蛋白,明确Wnt3 a浓度的分化体系能够使WA09和WTC-11成功诱导黑素细胞,使用相应浓度的Wnt3 a重组蛋白也能够达到相似的效果.结论:通过优化收集方案能够高效获得明确浓度的L-Wnt3 a条件培养基,将其应用于明确Wnt3 a浓度的培养体系能够成功诱导多能干细胞分化为功能性黑素细胞.
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