增塑剂DEHP通过铁死亡途径抑制小鼠GC-1spg精原细胞生长

Plasticizer DEHP inhibits the growth of mouse spermatogonia GC-1 spg through the ferroptosis pathway

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摘要目的:探究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)损伤小鼠GC-1 spg精原细胞功能的可能机制.方法:采用不同浓度DEHP(0、30、60、90、120 μmol/L)处理GC-1 spg细胞,通过CCK8 实验、克隆形成实验和Transwell实验检测细胞增殖和迁移能力的变化;化学分光光度比色法检测细胞内铁离子(Fe3+)和丙二醛的相对含量;蛋白质印迹实验检测细胞内铁死亡相关蛋白胱氨酸/谷氨酸逆转运蛋白(xCT)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的相对表达;细胞免疫荧光染色技术检测细胞内活性氧水平以及线粒体膜电位(JC-1)的改变.使用铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(1 μmol/L)与DEHP(90 μmol/L)联合培养GC-1 spg细胞24 h,CCK8 实验检测细胞的增殖能力.结果:与对照组(0 μmol/L)相比,30、60、90、120 μmol/L DEHP组细胞的增殖能力、克隆形成能力和迁移能力明显下降;丙二醛、活性氧、Fe3+(90、120 μmol/L DEHP组)含量明显升高;线粒体膜电位(60、90、120 μmol/L DEHP组)明显降低;GPX4(60、90、120 μmol/L DEHP组)和xCT蛋白表达水平明显降低.DEHP与Ferrostatin-1 联合培养后细胞增殖能力较DEHP单独培养明显提高.结论:DEHP能够抑制GC-1 spg细胞的增殖和迁移能力,降低GPX4 和xCT蛋白的表达,可能通过铁死亡途径引起细胞死亡.