旋覆代赭汤对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭活性的影响及机制研究
Effect and mechanism of Xuanfu Daizhe Decoction on proliferation,migration and invasion activities of esophageal cancer cells
摘要目的 探讨旋覆代赭汤对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭活性的影响及机制.方法 使用不同质量浓度的旋覆代赭汤处理人食管癌细胞系EC109,并依据旋覆代赭汤的质量浓度将细胞分为高浓度组(200 μg/mL)、中浓度组(100 μg/mL)、低浓度组(50 μg/mL)和空白组(0 μg/mL).分别采用CCK-8实验、划痕实验和Transwell侵袭实验检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭活性.采用蛋白质印迹法(Western blot)和细胞免疫荧光染色法检测各组细胞中糖酵解相关酶[己糖激酶2(HK2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)、磷酸果糖激酶1(PFK1)]的蛋白表达水平,并采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测上述酶编码基因mRNA相对表达量.构建裸鼠负瘤模型,分为对照组和旋覆代赭汤饲喂组(20 mg/kg),观察旋覆代赭汤对食管癌体内生长的影响.结果 CCK-8实验、划痕实验和Transwell侵袭实验结果显示,旋覆代赭汤可浓度依赖性抑制EC109细胞的增殖、迁移和侵袭活性.Western blot和细胞免疫荧光分析结果显示,与空白组相比,低浓度组、中浓度组、高浓度组细胞的HK2、LDHA、PFK1蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);qRT-PCR检测结果显示,与空白组相比,低浓度组、中浓度组、高浓度组细胞的HK2 mRNA、LDHA mRNA、PFK1 mRNA相对表达量均降低,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.000 1).覆代赭汤饲喂组裸鼠背部皮下的肿瘤体积小于对照组,肿瘤组织中LDHA蛋白表达水平低于对照组,促凋亡蛋白Bax表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 旋覆代赭汤可浓度依赖性抑制食管癌细胞糖酵解过程,进而抑制细胞增殖、迁移、侵袭及体内肿瘤生长.
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