换一批铜绿假单胞菌缺失绿脓菌素合成基因PAOⅡ的菌株构建及其耐药性研究
Construction of Pseudomonas aeruginosa strain with deletion of pyocyanin synthesis gene PAOⅡ and study on its drug resistance
摘要目的 构建铜绿假单胞菌(PA)缺失绿脓菌素合成基因PAOⅡ的菌株,并探究其耐药性.方法 通过分析PA中PAOⅡ基因型菌株的基因组,挖掘与绿脓菌素合成相关基因/基因簇在基因组中的分布.通过同源重组无缝敲除技术构建绿脓菌素合成基因phzM缺失的菌株,对比野生型与突变型菌株生长情况及其对药物的耐受性.结果 在https://www.kegg.jp/网站进行京都基因和基因组百科全书(KEGG)聚类分析,结果发现1个由9个基因(包括PhzA、PhzB、PhzC、PhzD、PhzE、PhzF、PhzG、phzM、PhzS)组成的基因簇,与KEGG PATHWAY:Phenazine biosynthesis-M00835 Pyocyanine biosynthesis通路完全吻合.通过同源重组敲除绿脓菌素合成关键基因phzM,交换后使用引物phzM-AF和phzM-BR验证在M9-柠檬酸培养基上生长的单克隆菌株,穿梭质粒pK18mobSacB-phzM-AB成功转染至PAOⅡ基因型菌株中.基因交换后,挑选能在无抗平板上生长的单克隆菌株,行聚合酶链式反应(PCR)以获得phzM基因无痕敲除成功的菌株.培养3、6 d时,PAOⅡ基因型菌株生物被膜形成厚度大于PAOⅡ-△phzM菌株,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 绿脓菌素合成缺陷菌株生物被膜合成能力降低,且对头孢类抗生素(头孢他啶)耐药性降低.
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关键词
铜绿假单胞菌绿脓菌素生物被膜耐药性PAOⅡ基因型菌株头孢类抗生素转染菌株Pseudomonas aeruginosapyocyaninbiofilmdrug resistancePAOⅡ genotype straincephalosporinstransfectionstrain
栏目名称
DOI
10.7619/jcmp.20245328
发布时间
2025-06-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（32200098）
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