摘要目的 比较不同剂量中波紫外线(UVB)辐射后人角膜上皮(HCET)细胞和兔角膜的生物学指标变化,以评估UVB辐射对角膜损伤效应的影响.方法 在细胞实验中,将HCET细胞按照辐射剂量分为0、6、12、18、24 mJ/cm2组.通过CCK-8检测UVB辐射对HCET细胞活力的影响,采用免疫荧光检测细胞内DNA损伤水平.在动物实验中,将15只健康新西兰白兔(30眼)按照辐射剂量随机分为0、1.35、2.16、4.32、6.48 J/cm2组,辐射组UVB暴露时间为30 min/d,持续3 d.采用裂隙灯显微镜检查、荧光素钠染色、中央角膜厚度检测、光学相干断层扫描(OCT)成像、苏木素-伊红(HE)染色等方法评估角膜损伤情况.结果 与对照组相比,辐射组随着辐射剂量的增加,细胞活力逐渐下降,DNA损伤水平逐渐升高.辐射组随辐射剂量的升高,兔角膜混浊程度逐渐加重,中央角膜区逐渐增厚,OCT呈现高强度散射光信号并形成阴影区域.HE染色、免疫组化、蛋白免疫印迹(WB)及荧光素钠染色结果显示,1.35 J/cm2组对角膜造成轻微损伤,损伤到达角膜上皮层;2.16 J/cm2组角膜呈密集点状分布,损伤由上皮层到达基质浅层,促红细胞生成素肝细胞受体A2(EphA2)蛋白着染细胞数量较少,颜色较浅,结果呈弱阳性;4.32 J/cm2组和6.48 J/cm2组角膜呈不可逆损伤,损伤由角膜上皮层、基质浅层逐渐深入到内皮层,EphA2蛋白着染细胞数量较多,颜色较深,结果为强阳性.结论 本研究通过细胞和动物实验综合评估了 UVB对HCET细胞和新西兰白兔角膜的剂量依赖性损伤效应,阐明了 UVB辐射可通过上调γ-磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)和EphA2诱导角膜细胞DNA损伤、促进炎症反应和引发细胞凋亡,初步探究角膜损伤自我修复能力和过程,为进一步研究紫外线辐射致角膜损伤机制和防护药物提供依据.