摘要目的 探讨长链非编码核糖核酸(LncRNA)G-四链形成序列(GSEC)在布鲁氏菌性脊柱炎(BS)中的作用及其对BS巨噬细胞极化的调节机制.方法 选取2021年5月—2024年5月收治的36例初诊BS患者及同期体检的30名健康人员为研究对象,采集所有受试者静脉血备用.人单核细胞(THP1)经培养后分组:对照组[细胞培养基中加入5％健康人群血清及50 ng/mL佛波酯(PMA)分化48 h]、BS组(细胞培养基中加入5％BS患者血清及50 ng/mL PMA分化48 h)、sh-NC组(转染对照载体 sh-NC)、sh-GSEC 组[转染含 LncRNA GSEC 的 shRNA(sh-GSEC)慢病毒载体]、sh-GSEC+LV-NC 组[转染含 sh-GSEC 的慢病毒载体与对照载体(LV-NC)]和sh-GSEC+LV-CTCF组[转染含sh-GSEC的慢病毒载体与含CCCTC结合因子(CTCF)过表达载体(LV-CTCF)的慢病毒载体].采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测各组转染分化的巨噬细胞中 LncRNA GSEC及CTCF mRNA表达水平;蛋白免疫印迹(Western blot)分析各组CTCF蛋白表达情况;RNA免疫沉淀(RIP)测定LncRNA GSEC与CTCF结合情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测纳入者血清和各组细胞上清液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-4、IL-10和转化生长因子β(TGF-β)水平;流式细胞术分析各组M1型和M2型巨噬细胞比例.结果 BS患者外周血M1型巨噬细胞含量较健康人群上调,M2型巨噬细胞含量较健康人群降低,差异均有统计学意义(P＜0.001).ELISA显示,与健康人群比较,BS患者血清中促炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平上调,抗炎因子IL-4、IL-10、TGF-β水平降低,差异均有统计学意义(P＜0.001).RT-qPCR结果显示,BS患者外周血中LncRNA GSEC表达水平为(4.05±0.26),高于健康人群的(1.02±0.11),差异有统计学意义(P＜0.001).RT-qPCR结果显示,sh-GSEC组细胞中LncRNA GSEC表达水平为(0.32±0.07)％,低于sh-NC组的(1.02±0.09)％,差异有统计学意义(P＜0.001).流式细胞术分析显示,sh-GSEC组M1型巨噬细胞含量较sh-NC组降低,M2型巨噬细胞含量升高,差异均有统计学意义(P＜0.01).ELISA检测结果显示,sh-GSEC组巨噬细胞上清液中促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平较sh-NC组降低,抗炎因子IL-4、IL-10、TGF-β水平升高,差异均有统计学意义(P＜0.01).Western blot分析显示,BS患者外周血中CTCF蛋白表达水平较健康人群上调,差异有统计学意义(P＜0.001).RIP结果表明,CTCF抗体所捕获的复合物中LncRNA GSEC含量较IgG抗体捕获的复合物中更富集(P＜0.001).RT-qPCR结果显示,sh-GSEC+LV-CTC 组巨噬细胞中 CTCF mRNA 表达水平为(3.53±0.47),较 sh-GSEC+LV-NC 组的(1.01±0.05)和sh-GSEC组的(1.02±0.04)升高,差异均有统计学意义(P＜0.01).Western blot结果显示,sh-GSEC+LV-CTCF组巨噬细胞中CTCF蛋白水平为(3.12±0.27),较sh-GSEC+LV-NC组(1.03±0.06)和sh-GSEC组(1.01±0.04)升高,差异均有统计学意义(P＜0.01).流式细胞术结果显示,sh-GSEC组M1型巨噬细胞含量较sh-NC组降低,M2型巨噬细胞含量升高,差异均有统计学意义(P＜0.01);sh-GSEC+LV-CTCF组M1型巨噬细胞含量较sh-GSEC+LV-NC组升高,M2型巨噬细胞含量降低,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 LncRNA GSEC通过靶向调控CTCF表达,调节巨噬细胞向M1型极化,促进BS的发生,这为理解BS病机及开发新的诊断和治疗标志物提供了新方向.