换一批非洲猪瘟病毒无标签p35蛋白的制备及间接ELISA抗体检测方法的建立
Preparation of tag-free p35 of African swine fever virus and development of an indirect enzyme linked immunosorbent assay(ELISA)antibody de-tection method
摘要为了进一步提高非洲猪瘟病毒(ASFV)间接酶联免疫吸附试验(ELISA)抗体检测方法的特异性,本研究构建了类弹性蛋白(ELP)标签与ASFV p35 融合表达载体,利用相变循环分离纯化融合蛋白后,用烟草蚀纹病毒蛋白酶(TEVP)切除ELP标签,制备获得无标签p35 蛋白,以此为包被抗原,通过一系列的条件摸索和优化,建立ASFV间接ELISA抗体检测方法.结果显示,ELP-p35 融合蛋白的相对分子质量大小约为80 000;制备获得的无标签p35 蛋白能够被非洲猪瘟阳性血清所识别;抗原包被最佳质量浓度为 2.00 μg/ml,待检血清最佳稀释比例为1 ∶200,二抗最佳稀释比例为1 ∶ 10 000,阴性和阳性判定阈值OD450为 0.171;与口蹄疫病毒(FMDV)、猪圆环病毒 2 型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)和伪狂犬病毒(PRV)等阳性血清无交叉反应,特异性好;批内、批间试验结果显示变异系数都小于 5.000%,重复性好;可检测 400 倍稀释的血清,敏感性较高;与商品化检测试剂盒(ING)检测结果的符合率高达 100%.结果表明,用本研究制备的ASFV无标签p35 蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA方法可用于ASFV抗体的检测,为该病的进一步精准检测提供了技术手段.
更多相关知识
关键词
非洲猪瘟类弹性蛋白无标签p35蛋白间接ELISA方法African swine feverelastin-like polypeptidetag-free p35 proteinindirect ELISA
分类号
S852.65+1
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1000-4440.2023.05.013
发布时间
2023-09-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
- 浏览3
- 被引0
- 下载2
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
