16S rDNA生物芯片微阵列方法检测立克次体的初步研究
Development of a universal microarray system for the detection of rickettsiae
摘要目的:以16S rDNA为对象,生物芯片微阵列技术为平台,建立一种能在未知标本中快速检测6种立克次体的方法.方法:针对每种立克次体16S rDNA的可变区,分别设计和合成4条寡核苷酸探针.利用微阵列技术构建立克次体检测用生物芯片.待测立克次体染色体DNA用16S rRNA通用引物扩增掺入荧光素,然后与芯片杂交.利用各种立克次体的4条特异性探针是否全部出现杂交信号来做出判断.结果:以寡核苷酸为探针的生物芯片系统可以实现6种立克次体的检测.对伯氏考克斯体、汉氏巴尔通体、恙虫病东方体,本系统可以将其鉴定到种或属的位置.从第4号探针的不同可以将普氏立克次体和立氏立克次体这两个群区分开来.犬埃立克体检测始终为阴性,可能和没有合适的标本有关.从接到样品到判读出结果,整个检测过程大约需要4.5h.敏感性检测结果表明本法比PCR-电泳法敏感10倍.结论:利用16S rDNA生物芯片微阵列方法可以快速检测6种立克次体.
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