摘要目的:筛选新的血小板生成素(TPO)受体胞内区相互作用蛋白并确定相互作用.方法:以TPO受体胞内区为诱饵蛋白,进行酵母双杂交文库的筛选,RT-PCR扩增筛选到的基因并克隆到相应载体上,Western印迹方法检测其在不同组织与细胞内的表达;进行哺乳动物细胞内双杂交、免疫共沉淀、激光共聚焦实验确证相互作用.结果:从酵母双杂交文库筛选到RACK1基因,检测到其在不同组织与细胞内表达都很丰富,哺乳动物细胞内双杂交、免疫共沉淀证明RACK1同TPO受体Mpl的胞内区存在相互作用,而细胞内共定位实验证明两者在哺乳动物细胞内存在共定位现象,即两蛋白的相互作用可能具有生理意义.结论:筛选到的RACK1蛋白同TPO受体Mpl的胞内区存在相互作用.
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