换一批
换一批蛋白酶体激活因子REGγ的重组表达及其体外功能的初步探讨
A preliminary study on recombinant expression and function in vitro of proteasome activator REGγ
摘要目的 蛋白酶体激活因子11S调节蛋白复合物γ亚单位(11S regulator complex gamma subunit,REGγ)的重组表达,初步探讨其与骨形成负调控分子酪蛋白激酶-2相互作用蛋白-1(casein kinase-2 interacting protein-1,CKIP-1)的相互作用.方法 首先以质粒pCMV-Myc-REGγ为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增出765 bp的REGγ cDNA片段,然后亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-2并转化入大肠杆菌BL21经IPTG诱导表达,表达产物超声破碎后进行SDS-PAGE和Western印迹鉴定,进而通过GST Pull-down实验验证REGγ是否与CKIP-1存在相互作用.结果 通过测序证实原核表达载体pGEX-4T-2-REGγ构建成功,进一步表达鉴定发现GST-REGγ蛋白主要以可溶性的形式存在于裂解上清中;GST Pull-down实验表明REGγ与CKIP-1存在明显的相互作用.结论 REGγ与CKIP-1在体外存在相互作用,为进一步深入研究REGγ对CKIP-1的调控作用奠定了基础.
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关键词
重组表达质粒蛋白酶体激活因子REGγ酪蛋白激酶-2相互作用蛋白-1聚合酶链反应recombinant expressionplasmidsproteasome activator REGγcasein kinase-2 interacting protein-1polymase chain reaction
分类号
Q556
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1674-9960.2010.01.002
发布时间
2010-04-12
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