换一批沙门菌属pad蛋白的原核表达及抗原性的鉴定
Prokaryotic expression of Salmonella possible outer membrane adhesin and identification of its antigenicity
摘要目的 在大肠杆菌中表达沙门菌属pad蛋白,纯化后制备兔抗pad抗体.方法 利用PCR方法从肠炎沙门菌中扩增出pad基因,构建pET-32a(+)-pad重组表达质粒;将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选阳性克隆,测序鉴定后,优化IPTG浓度、诱导温度和诱导时间以诱导重组蛋白的表达;以纯化的pad蛋白免疫家兔,制备抗pad多克隆抗体并进行鉴定.结果 与结论 成功扩增得到pad基因,经双酶切和测序证实重组表达质粒构建成功,经过诱导条件的优化,在大肠杆菌中表达出相对分子质量为41×103的目的 蛋白;纯化的重组蛋白免疫家兔后,能够有效地刺激家兔产生特异性抗体,经琼脂糖双向扩散测定抗血清效价达到1∶32以上.为进一步研制沙门菌属体外快速检测试剂打下了基础.
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栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1674-9960.2011.08.008
发布时间
2011-11-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家科技重大专项（2008ZX10004-003）
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