换一批弗氏志贺菌ΔlysA突变株的构建及SILAC技术的应用尝试
Construction of a lysA deletion mutant of Shigella flexneri and pre-experiment of SILAC
摘要目的 构建弗氏2a志贺菌301株赖氨酸营养缺陷型突变株,为将细胞培养条件下稳定同位素标记(SILAC)技术应用于志贺菌蛋白质组学研究奠定基础.方法 采用λ-Red重组系统对弗氏2a志贺菌301株lysA基因进行缺失,对野生株和突变株进行基本的表型测评和毒力评价,并利用双向电泳技术比较二者在全菌蛋白表达谱上的差异,最后将突变株分别在含有12C6-赖氨酸和13C6-赖氨酸的培养基中培养,根据双向电泳胶图取对应蛋白点进行胶内酶切及MALDI-TOF/TOF分析.结果 成功构建了301 lysA基因缺失突变株,蛋白鉴定结果显示所取对应蛋白点为同一蛋白,在质谱图上轻重同位素峰位移为6 amu.结论 本研究所构建的赖氨酸营养缺陷型突变株适合进行SILAC分析.
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DOI
10.3969/j.issn.1674-9960.2012.05.007
发布时间
2012-07-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（81071324,81171531）
国家重点基础研究发展计划（973计划）（2011CB504901）
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