定量检测肝细胞生成素Cn的双抗体夹心ELISA检测方法的建立

Establishment of human hepatopoietin Cn sandwitch ELISA with newly-developed monoclonal antibodies

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摘要目的建立定量检测肝细胞生成素Cn (HPPCn)的双抗体夹心ELISA方法.方法利用杂交瘤方法获得8个抗HPPCn单克隆抗体(mAb),并行SDS-PAGE和Western印迹对纯化抗体特性进行鉴定.利用镀金芯片法对8个抗体进行配对检测.通过方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体的最适工作浓度.以纯化的HPPCn抗原为标准品建立标准曲线.结果得到了8株稳定分泌抗人HPPCn抗体的杂交瘤细胞株,分别为Ab 65-29-6,Ab_3-3-3,Ab_9-34-1,Ab_4-8-12,Ab_7-8-10,Ab_2-30-23,Ab_1 1-11-12和Ab_12-27-23.8个抗体均能够特异结合HPPCn抗原,其中Ab_65-29-6与细胞中HPPCn结合的特异性最好.经抗体配对检测证实最佳配对组合为:Ab_2-30-23和Ab_4-8-12.包被抗体Ab_2-30-23和识别抗体Ab 4-8-12的最适工作浓度为2.5 μg/ml,最适稀释度为1∶2000,标准曲线检测的线性范围为5.0～60 ng/ml.结论制备了可特异性检测人HPPCn蛋白的单克隆抗体,并建立了一种可用于定量检测人HPPCn的双抗体夹心ELISA方法.

作者代学强 ^[1] 刘勇 ^[2] 吴昊 ^[2] 车薇 ^[3] 高慧英 ^[2] 赛岩 ^[2] 吴飞林 ^[2] 周旭 ^[4] 崔春萍 ^[2] 学术成果认领

作者单位军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京100850;山东大学附属省立医院器官移植中心肝胆外二科,济南250021 ^[1] 军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京,100850 ^[2] 武警总医院药剂科,北京,100039 ^[3] 山东大学附属省立医院器官移植中心肝胆外二科,济南,250021 ^[4]

关键词肝细胞生成素Cn 方阵滴定法双抗体夹心包被抗体酶标抗体 hepatopoietin Cn square matrix titrimetry double antibody sandwich coating antibodies enzyme labeled antibodies

主题词抗体(Antibodies)肝细胞生长因子(Hepatocyte Growth Factor)方法(Methods)配对(Pair Bond)人(Persons)

分类号 Q813.2

栏目名称论著

DOI 10.7644/j.issn.1674-9960.2013.06.009

发布时间 2013-08-13

基金项目

国家自然科学基金资助项目 山东省自然科学基金资助项目 山东省优秀中青年科学家科研奖励基金资助项目