摘要目的：通过过表达N－糖基转移酶，构建1株糖基化修饰效率更高的糖基工程酵母。方法利用尿嘧啶（URA3）营养缺陷型筛选标记，在糖基工程酵母4－32中转入醇氧化酶1（alcohol oxidase 1，AOX1）启动子控制的利士曼原虫N－糖基转移酶星状孢子素和温度敏感性酶3（staurosporine and temperature sensitivity 3，STT3）D亚基，通过SDS－PAGE、Western印迹和肽N－糖苷酶F（peptide－N－asparigineamidase F，PNGase F）酶切等方法，分析4－32－STT3D表达的抗人表皮生长因子受体2（HER2）抗体（anti－human epidermal growth factor receptor 2）和粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte－macrophage colony－stimulating factor，GM－CSF）N－糖基化程度，并测定STT3D转入和诱导表达对酵母生长情况的影响。结果 SDS－PAGE结果显示，4－32－HL菌表达的抗HER2抗体除有一条相对分子质量约55×103的重链主带外，还有一条约50×103的未糖基化条带。4－32－HL－STT3D菌表达为均一的55×103条带，无50×103条带。 PNGase F酶切后，上述重链呈50×103的均一条带。 Western印迹证明以上所有条带均为抗体成分。以GM－CSF作为报告蛋白验证STT3D的作用，结果显示，4－32－GM－CSF菌表达的GM－CSF为22×103和20×103的两条带，而4－32－GM－CSF－STT3D表达则为均一的22×103条带。 PNGase F酶切4－32－GM－CSF和4－32－GM－CSF－STT3D菌表达的GM－CSF后，GM－CSF呈18×103的均一条带。分别测定STT3D外源基因转入和诱导表达时对酵母生长情况的影响，统计学分析显示，STT3D转入不诱导对酵母生长影响不显著，STT3D诱导表达对酵母生长影响极显著。结论过表达N－糖基转移酶的糖基工程酵母对靶标蛋白具有更高的N－糖基化修饰效率。