换一批串联杂种泛素结合结构域蛋白（ThUBD）在大肠杆菌中的可溶性高效表达
Soluble expression of tandem hybrid ubiquitin-binding domains (ThUBD) in prokaryotic cytoplasm of Escherichia coli BL21(DE3)
摘要目的：提高人工串联杂种泛素结合结构域蛋白（ tandem hybrid UBD， ThUBD）在大肠杆菌中的可溶性表达量，为泛素化蛋白研究提供高效特异的富集方法。方法根据大肠杆菌同义密码子相对频率（ RFSC）表对大肠杆菌的密码子进行分类，计算ThUBD密码子的相对适应度，并根据分析结果对ThUBD的密码子进行优化；诱导表达和蛋白定量检测密码子的优化结果；亲和纯化及泛素化蛋白富集研究检测密码子优化后的ThUBD－S的UbC结合能力。结果根据分析结果优化ThUBD密码子，使得适于大肠杆菌基因表达的密码子从48％增加到75％，并消除了阻碍转录翻译的密码子，其密码子适应指数（CAI）从0．63升高到0．88。密码子优化后的ThUBD其可溶性蛋白ThUBD－S的表达量增加了4倍，达到总蛋白的13．06％。同时，优化后的ThUBD－S可能具有更高的UbC的结合能力。结论 ThUBD的基因序列经过优化后，其在大肠杆菌中的表达量升高4倍左右。同时，序列优化不影响融合蛋白ThUBD在大肠杆菌中的可溶性表达和结合UbC的能力。
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关键词
ThUBD泛素化蛋白大肠杆菌密码子优化融合表达蛋白质组学ThUBDubiquitin conjugates(UbC)Escherichia colicodon optimizationrecombinant expressionproteomics
分类号
Q51（蛋白质）
栏目名称
DOI
10.7644/j.issn.1674-9960.2016.10.005
发布时间
2016-11-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家重点研发计划（2016YFA0501300）
国家自然科学基金（31670834）
国家高技术研究发展计划（863计划）（2014AA020900）
国家高技术研究发展计划（863计划）（2014AA020607）
北京市自然科学基金（5152008）
北京百名科技领军人才计划资助项目
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