换一批
换一批铜绿假单胞菌碱性蛋白酶AprA及其抑制剂AprI的表达、纯化和初步的活性验证
Expression, purification and detection of activities of AprA and its inhibitor AprI from Pseudomonas aeruginosa
摘要目的：利用大肠杆菌BL21（DE3）重组表达铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PAE）重要毒力因子碱性蛋白酶（AprA）、碱性蛋白酶抑制剂（AprI）和鞭毛蛋白（flagellin），并检测AprA和AprI的生物学活性。方法以该菌PAO1的基因组为模板，PCR扩增aprA、aprI和flic基因，构建重组表达载体pET-28a-AprA、pET-28a-AprI和pET-28a-鞭毛蛋白，转化至大肠杆菌BL21（DE3），利用IPTG诱导表达，将包涵体变性、复性后纯化获得AprA蛋白，通过镍亲和树脂纯化获得AprI和鞭毛蛋白。利用SDS-PAGE检测AprA裂解鞭毛蛋白活性。结果重组蛋白AprA以包涵体的形式表达，AprI和鞭毛蛋白以可溶性形式表达。 AprA能裂解鞭毛蛋白，加入AprI可抑制AprA裂解鞭毛蛋白。结论 PAE分泌的AprA蛋白具有裂解鞭毛蛋白的活性，该活性能被AprI抑制。该研究为深入研究PAE的AprA的致病机制奠定了基础。
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关键词
铜绿假单胞菌碱性蛋白酶碱性蛋白酶抑制剂鞭毛蛋白Pseudomonas aeruginosaalkaline protease(AprA)inhibitor of alkaline protease(AprI)flagellin
主题词
蛋白(Egg White)鞭毛蛋白(Flagellin)铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)酶抑制剂(Enzyme Inhibitors)大肠杆菌(Escherichia coli)
分类号
R446.61
栏目名称
论著
DOI
10.7644/j.issn.1674-9960.2016.12.008
发布时间
2017-02-16
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