换一批9种发热伴出疹病原体基因芯片检测方法的建立
Development of a DNA-based microarray for detection of nine pathogens causing rash and fever illness
摘要目的 建立一种能同时、快速、准确地检测包括:麻疹病毒、风疹病毒、肠道病毒71型、水痘带状疱疹病毒、登革热病毒、人类小DNA病毒B19、柯萨奇病毒A16型、A组 β型酿脓链球菌(溶血性链球菌)、伤寒沙门菌,9种发热伴出疹病原体的化学发光基因芯片的方法.方法 根据9种病原体特异基因中的高度保守区序列设计引物与探针,进行多重不对称PCR扩增,将带有标记的扩增产物与带有特异性探针的芯片杂交,经洗涤、化学发光显色后进行结果分析.经多重PCR体系、杂交反应和化学发光检测条件的优化,评价该芯片的特异性、灵敏度和重复性.实时荧光PCR法与芯片法分别检测肠道病毒EV71梯度稀释的核酸,比较两种方法的灵敏度.结果 共筛选出9对特异性扩增引物和11条特异性检测探针.该芯片具有良好的特异性、灵敏度和重复性.质粒参考品和体外转录RNA参考品的最低检测限为3×103拷贝/反应,芯片法的灵敏度为实时荧光PCR法的1/10.检测74例临床样本的灵敏度为95%,特异性为85.7%,总符合率为93.2%.结论 建立了一种可同时检测9种发热伴出疹病原体的化学发光基因芯片的检测方法,为发热伴出疹的临床诊断和流行病学调查提供了一种高通量的筛查手段.
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关键词
发热伴出疹多重PCR基因芯片化学发光法rash and fever illnessmultiple PCRDNA microarraychemiluminescent measurements
分类号
R511（传染病）
栏目名称
DOI
10.7644/j.issn.1674-9960.2017.02.013
发布时间
2017-04-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家科技重大专项（2011ZX10004-001）
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